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Annexin V PE/7-AAD 凋亡檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面都起到 十分重要的作用。Annexin V 是一種分子量為 35.8 KD 的 Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡 過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）高親和力特異結(jié)合。FITC-Annexin V 結(jié) 合到凋亡細(xì)胞后，在藍(lán)色光的激發(fā)下，發(fā)出綠色熒光，區(qū)分出凋亡細(xì)胞與正常細(xì)胞。碘化丙啶 （Propidium iodide，PI）是一種核酸染料，它不能穿透完整細(xì)胞膜，但對(duì)凋亡晚期細(xì)胞和死細(xì)胞的 破損細(xì)胞膜能夠穿透，并使細(xì)胞核紅染。將 FITC-Annexin V 與 PI 匹配使用，可以將凋亡早期的細(xì) 胞和晚期的細(xì)胞區(qū)分開來。

Annexin V PE/7-AAD 凋亡檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面，這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸（PS）從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外，使 PS 暴露在細(xì)胞膜外表面。PS 是一種帶負(fù)電荷的磷脂，正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面，在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對(duì)稱性被破壞而使PS 暴露在細(xì)胞膜外。Annexin V 具有易于結(jié)合到磷脂類如 PS 的特性，對(duì) PS 有高度的親和性。因此，該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測(cè)暴露在細(xì)胞膜表面的 PS。PS 轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所*的，也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的，而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就破壞了。因此，可以采用 AnnexinV 與7-AAD 雙染的方法，通過流式檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡。

操作步驟:

標(biāo)記的 Annexin V 可結(jié)合流式細(xì)胞儀用于檢測(cè)細(xì)胞外膜上的磷酯酰絲氨酸
1.用去離子水按 1:4 稀釋結(jié)合緩沖液（4ml 結(jié)合緩沖液+12ml 去離子水）；
2.用 4℃預(yù)冷的 PBS 洗細(xì)胞兩次，用 250ul 結(jié)合緩沖液重新懸浮細(xì)胞，調(diào)節(jié)其濃度為 1× 106/ml；
3.取 100μl 的細(xì)胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V/PE 和 10μl 7AAD 溶液；
4.混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘；
5.在反應(yīng)管中加 400μl PBS，流式細(xì)胞儀（FACS）分析

（注：消化細(xì)胞時(shí)不能用含 EDTA 的胰酶）

 相關(guān)文獻(xiàn):

《The establishment of clonally derived chicken embryonic fibroblast cell line (CSC) with high transfection efficiency and ability as a feeder cell》 作者:Ruifeng Zhao , Jing Jin , Xinyu Sun , Kai Jin , Man Wang , Mahmoud F. Ahmed , Qisheng Zuo , Yani Zhang ,Zhenhua Zhao , Guohong Chen , Bichun Li 期刊:Journal of cellular Biochemistry 影響因子:3.062 PMID:30076744